猪冷冻精液的解冻及人工授精技术
虎军红 李军琪 关进科 任碧清 陈斌 张元林
摘 要：在为猪场节约生产成本、提高猪种质量上，猪冷冻精液能够起到良好的作用。然而，由于冷冻精液具有不同于常温精液的特性，在用于人工授精前对其进行解冻、稀释等准备工作也有严格的要求。本文详细阐述了冷冻精液的准备工作，并着重介绍了解冻、稀释等关键环节的操作技术和步骤。
关键词：冷冻精液;解冻;稀释;人工授精;猪
中图分类号：S814.3 文献标志码：B 文章编号：1001-0769（2022）02-0070-03
随着猪人工授精技术在养猪业中的广泛应用，猪冷冻精液也不断走向市场。然而，在给发情母猪配种前，冷冻精液的准备远比常温精液的准备复杂得多，关键在于冷冻精液的解冻和稀释环节。因此，尽管两种精液的授精方法或所用输精技术基本相同，然而冷冻精液的解冻和稀释的科学与否会直接决定母猪配种的成败。根据笔者在实践工作中积累的經验，本文将着重介绍猪冷冻精液的解冻、稀释等详细操作技术和步骤，以供同行参考。
1 所需物品及解冻前的准备
（1）温度计。准备2支测量稀释液和解冻水浴锅中水的温度的精准温度计，并做好标记，以避免交叉使用和污染精液，用后应及时冲洗干净。如不能确定温度计的精准度，可用体温计提前反复确定温差。
（2）恒温水浴锅。恒温水浴锅用于稀释液的预温，孵浴少量分装稀释好的冷冻精液。如果条件允许，建议准备2个水浴锅，将一个水浴锅中的水温设置为30.5 ℃，将另一个水浴锅中的水温设置成37 ℃，水温以精准温度计实测值为准。
（3）电子秤。电子秤用于称量冷冻精液的专用稀释粉，可使用一次性称量纸，或用量杯准确称取所需的稀释粉。
（4）量杯。建议选用容积为1 000 mL以下的量杯。如果量杯的刻度不够精准，可以用电子秤称取所需的纯净水或双蒸水。在使用结束后，要及时用纯净水或双蒸水冲洗，使量杯保持卫生，随后烘干备用。
（5）纯净水或双蒸水。在配制稀释液以及冲洗量杯和稀释液专用的温度计时，必须使用纯净水或双蒸水，不可用含金属矿物质等杂质的水，如矿泉水等。在使用前，可选用便携式水质测定仪测定水质。
（6）稀释液。冷冻精液的专用稀释粉应利用冰箱进行冷藏保存，在使用前提前1 h取出备用。进口的猪冷冻精液为3 mL/支，即每支精液管含3 mL的冷冻精液，因而应按160 mL纯净水或双蒸水加入8 g稀释粉的比例配制稀释液。当稀释粉在水中完全溶解后，将盛有稀释液的量杯放入水温为30.5 ℃的水浴锅中，经过30 min的平衡后方可使用。稀释液要现用现配，冷冻精液专用稀释粉打开包装后要尽快用完;如不能一次性用完，剩余的要继续冷藏，但不宜长时间存放。
（7）空调或电暖设备。在对猪冷冻精液进行解冻前，开启空调或电暖设备，使室温上升至28 ℃～30 ℃，这将有利于维持冷冻精液解冻后精子的活力。
（8）泡沫箱。泡沫箱具有良好的保温性，可用于猪冷冻精液的解冻，准备2个，其中一个备用。在给猪冷冻精液解冻前，在泡沫箱中至少装入10 L以上的温度为50.5 ℃的热水，水越多水温的降低速度越慢，越有利于对多管冷冻精液的解冻。在给冷冻精液解冻时，应随时监测水温，并根据所测结果适时补充热水。不宜采用水浴锅解冻，因为水浴锅中不同层次的水具有不同的温度。
（9）干纸巾。干纸巾用于接取冷冻精液管，擦干解冻后管壁的水分，防止污染和影响精液品质。
（10）输精瓶。每支冷冻精液需配备2支干净的一次性输精瓶，可多准备一支用于留样孵浴观察。
（11）一次性注射器。以20 mL～50 mL规格的一次性注射器为宜，用于抽取稀释液以冲洗冷冻精液管，不宜反复使用，或交叉用于不同品种公猪的精液。
（12）剪刀。用于剪断冷冻精液管两端，让解冻后的冷冻精液顺利流入装有稀释液的输精瓶。在同时对不同品种或品系公猪的冷冻精液进行解冻时，应注意及时清洁剪刀，防止精液品种交叉。
（13）长柄弯头钳。用于从液氮罐中夹取冷冻精液并在水浴中解冻，建议使用25 cm～ 30 cm长的弯头钳。
（14）计时器。用于解冻中计时使用，如无计时器，可用手机代替。
2 冷冻精液的解冻步骤
（1）向准备好的一个输精瓶中倒入60 mL提前配制并已经预温到30.5 ℃的冷冻精液稀释液。
（2）用长柄弯头钳从液氮罐中快速找到并取出需要解冻的冷冻精液管，然后用纸巾小心接住冷冻精液管，同时核对标记于管壁上的种猪信息。
（3）用长柄弯头钳迅速夹住冷冻精液管的中部，快速将其以45°的方向放入温度为50.5 ℃的温水中，并在温水中匀速移动以进行解冻，满50 s后立即取出，并用纸巾快速擦干管壁水分。
（4）竖立擦干后的冷冻精液管，并用剪刀剪掉上端靠近气泡的封装球，然后倒置于装有稀释液的输精瓶口处，并紧贴瓶口侧壁。待气泡上移到管顶后剪掉另一端的封装球，让管内精液贴着瓶壁流入输精瓶内，再用一次性注射器吸取稀释液，将管内残留的精液冲入输精瓶内。
（5）盖好输精瓶的瓶盖，轻轻转动摇匀，然后将稀释后的精液平均分成2瓶，并分别贴壁加注稀释液至80 mL，排除气体后盖好瓶盖，随后进行编号标记。
（6）稀释的精液在被送去配种前可预留少量，并装入另一个输精瓶中。将预留的稀释精液连同输精瓶一同放在温度为37 ℃的水浴中，停留5 min～10 min后观察精子活力。
（7）冷冻精液经解冻并稀释后应立即给母猪配种。在运送至配种舍的过程中，应将稀释精液放入便携式恒温箱内，或者用37 ℃的水袋和干毛巾做好保温，且应在稀释后30 min内完成输精。在对冷冻精液进行大批量解冻时，要求多人配合流水作业，一次运送不宜超过4瓶。
3 冷冻精液的储存和液氮罐的维护
冷冻精液必须储存在装有液氮的液氮罐中。转移或挑选时，在液氮外的停留时间不宜超过5 s，应尽量在罐口内进行，或者在装有液氮的泡沫箱中进行。
平时应将装有液氮的液氮罐置于阴凉处，选取冷冻精液后应及时盖上罐盖，防止液氮受热挥发。液氮罐需定期称重以判断剩余的液氮量，接近预警重量时要及时补充液氮，使冷冻精液管完全沉浸于液氮中。按液氮密度0.88 kg/L计算60%液氮余量的重量，再加上空罐重量，计算出预警重量。建议另配一个液氮罐，并单独储备一定数量的液氮，以方便为存放冷冻精液的液氮罐及时添加液氮。可参照表1中的参数判断液氮罐中液氮的余量。
4 人工授精
4.1 授精前的准备
应选择合适的输精枪，输精枪的大小由后备母猪、经产母猪、老母猪的体型大小决定，选大、中或小相应规格的一次性输精枪 2把，其中1把留作备用。准备1块干净抹布，5 000 mL温水，5 000 mL 0.02%～0.10%高锰酸钾温水，1瓶专用润滑剂，1把专用清洗器。
4.2 清洗消毒
配种员首先消毒双手，并立即佩戴一次性手套。用温水清洗母猪外阴和臀部周围，再用高锰酸钾温水进行消毒，随后用抹布擦干外阴口。
4.3 输精枪的使用
用润滑剂涂抹输精枪的海绵，以斜向上方45°的方向缓慢插入母猪生殖道直至无法插进，此时逆时针旋转3圈，以输精枪插入约三分之二为宜。当无法将输精枪插进时，将往回拉1 cm左右，随后连接输精瓶开始输精。输精时应抬高输精瓶，轻轻挤压以排出母猪生殖道中的空气。输精前要先摇匀精液，插入输精枪时配种员的手不宜直接触碰输精枪前三分之二的部分。
4.4 输精
输精时精液的输入要缓慢，不能用手挤压输精瓶。精液输送到一半时，可以在输精瓶的底部扎一个小口，让精液慢慢流入，整個输精过程应控制在5 min左右。
在输精的同时，配种员可以用手按压母猪背部，按摩外阴、臀部内侧、乳房等敏感区域，以刺激子宫收缩倒吸精液。
输精完毕时不宜立即拔出输精枪，可以在输精枪末端5 cm左右处对折，并拔下精液瓶套在输精枪对折末端，以防止精液倒流。同时继续按压母猪背部2 min～3 min，再等 3 min～5 min后拔出输精枪，完成输精过程。